Secuenciación de Amplicones por Metodología Sanger

Servicio de secuenciación de productos de PCR y plásmidos

Utilizamos el Analizador Genético ABI 3500 (Life Technologies) para secuenciar amplicones de hasta ~700 pb. El usuario debe proveer:

• Producto de PCR purificado (20 ng/µl, 10 µl por reacción) o preparación de plásmido (100 ng/µl, 10 µl).
• Primers específicos en tubo separado (5 µM, 5 µl por reacción; T_m 50 – 58 °C).
• Planilla de envío con datos completos del paciente/muestra y tipo de corrida (un solo sentido o fwd + rev).

Requisitos y Preparación de Muestras

1. La purificación debe realizarse con kits comerciales (no usar protocolos con PEG, para evitar obstrucción de capilares).
2. Si se envía PCR sin purificar, no nos responsabilizamos por lecturas superpuestas o alto ruido de fondo.
3. Las reacciones se reciben sólo en múltiplos de 8 y se programan una vez por semana junto con otros servicios.
4. Etiquetar todos los tubos de manera legible y coherente con la planilla de muestras.

Procedimiento

1. Carga de muestras en el secuenciador ABI 3500.
2. Corrida de secuenciación (lectura de hasta ~700 pb).
3. Procesamiento automático de señales y generación de archivos .ab1.
4. Envío de resultados por correo electrónico.

Tras entrega de resultados, los remanentes de muestra se conservan 30 días para retiro; luego de esa fecha serán descartados.

Entregables

• Archivos de secuencia .ab1 de cada reacción.
• Reporte de calidad de lectura y trazas.

Contacto

Dirección:
Gallo 1330 – C1425EFD, Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas (IMIPP) CONICET-GCBA

Correos electrónicos:
secretaria.imipp.conicet@gmail.com
imipp@conicet.gov.ar

Teléfono:
(011) 4962-9138