Seminarista: Lic. Armella Sierra, Alicia Beatriz

Título: "Caracterización funcional del dominio carboxilo terminal de la nucleoproteína del virus junín"

Resumen: El arenavirus Junín (JUNV) es el agente causal de la Fiebre Hemorrágica Argentina, una enfermedad endémica de la región central de nuestro país. Los arenavirus son virus envueltos, cuyo genoma está constituido por dos segmentos de ARN de cadena simple, llamados S y L. El segmento S codifica la nucleoproteína (NP) y el precursor de las glicoproteínas de envoltura. El segmento L codifica la ARN polimerasa, y la proteína matriz Z, que es esencial para la morfogénesis viral. Ambos segmentos genómicos se asocian estrechamente a moléculas de NP formando las nucleocápsides virales, que sirven de templado para la replicación del genoma viral. Previamente, hemos demostrado, en el contexto celular, que el dominio C-terminal de NP (CTD) está involucrado en la incorporación de las nucleocápsides a las partículas virales, a través de su interacción con la proteína Z. Por otro lado, se conoce que el dominio CTD de las proteínas NP de los arenavirus posee un motivo DEDDh (Asp-Glu-Asp-Asp), conservado en la familia DEDDh de 3'-5' exonucleasas. Con la excepción de JUNV, se ha demostrado para otros miembros de la familia que este motivo se asocia a la actividad exonucleasa de la proteína. En este trabajo, se expresó, purificó y caracterizó el dominio CTD de la proteína NP de JUNV y se obtuvo la proteína Z de JUNV como fusión a Maltose Binding Protein (MBP). Se testeó la actividad nucleasa de CTD NP sobre diferentes sustratos. La interacción entre CTD NP y Z in vitro fue analizada mediante ensayos de retardo en geles de agarosa. Además, la interacción Z-NP fue evaluada en el contexto celular, mediante experimentos de inmunoprecipitación utilizando mutantes puntuales de Z. Los resultados sugieren que, al igual que otros arenavirus, NP de JUNV presenta actividad exonucleasa, no reportado previamente para este virus, y que su dominio CTD interactúa directamente con Z. Este trabajo puede contribuir a la identificación de nuevos blancos moleculares para el desarrollo de terapias específicas contra JUNV y otros arenavirus patógenos.